Serological reactivity of different antigenic preparations of Leishmania (Leishmania) amazonensis and the Leishmania braziliensis complex.

Total antigen from Leishmania (Leishmania) amazonensis and isolates from the Leishmania braziliensis complex, along with their respective antigenic fractions obtained by affinity chromatography on concanavalin-A-Sepharose and jacalin-agarose columns evaluated using immunoenzymatic ELISA assay. For this, serum samples from 229 patients were used, grouped as American tegmental leishmaniasis (n masculine=58), visceral leishmaniasis (n masculine=28), Chagas disease (n masculine=49), malaria (n masculine=32), tuberculosis (n masculine=13) and healthy volunteers (n masculine=49). Samples from American tegmentary leishmaniasis showed higher reactivity with antigens isolated from the Leishmania braziliensis complex than with antigens from Leishmania amazonensis (p<0.001). ELISA assays showed a sensitivity range from 60% to 95% with antigens isolated from the Leishmania braziliensis complex. There was marked nonspecific reactivity among serum samples with the use of antigenic fractions binding with concanavalin-A and jacalin from both Leishmania complexes, in comparison with other antigens (p<0.001). The results presented in this study suggest that the use of homologous antigens increases the efficiency of anti-Leishmania immunoglobulin detection, which may be very valuable for diagnostic purposes.

Serological reactivity of different antigenic preparations of Leishmania (Leishmania) amazonensis and the Leishmania braziliensis complex / Reatividade sorológica frente a diferentes preparações antigênicas de Leishmania (Leishmania) amazonensis e do complexo Leishmania braziliensis

Total antigen from Leishmania (Leishmania) amazonensis and isolates from the Leishmania braziliensis complex, along with their respective antigenic fractions obtained by affinity chromatography on concanavalin-A-Sepharose and jacalin-agarose columns evaluated using immunoenzymatic ELISA assay. For this, serum samples from 229 patients were used, grouped as American tegmental leishmaniasis (nº=58), visceral leishmaniasis (nº=28), Chagas disease (nº=49), malaria (nº=32), tuberculosis (nº=13) and healthy volunteers (nº=49). Samples from American tegmentary leishmaniasis showed higher reactivity with antigens isolated from the Leishmania braziliensis complex than with antigens from Leishmania amazonensis (p<0.001). ELISA assays showed a sensitivity range from 60 percent to 95 percent with antigens isolated from the Leishmania braziliensis complex. There was marked nonspecific reactivity among serum samples with the use of antigenic fractions binding with concanavalin-A and jacalin from both Leishmania complexes, in comparison with other antigens (p<0.001). The results presented in this study suggest that the use of homologous antigens increases the efficiency of anti-Leishmania immunoglobulin detection, which may be very valuable for diagnostic purposes.

Antígeno total de Leishmania (Leishmania) amazonensis e isolado do complexo Leishmania brazilienis, assim como suas respectivas frações antigênicas obtidas por cromatografia de afinidade em coluna de concanavalina-A ligada a sepharose e Jacalina ligada a agarose foram avaliadas por ensaio imunoenzimático ELISA. Para tanto, foram utilizadas amostras de soros de 229 pacientes agrupadas em leishmaniose tegumentar americana (nº=58), leishmaniose visceral (nº=28), doença de Chagas (nº=49), malaria (nº=32), tuberculose (nº=13) e voluntários saudáveis (nº=49). Houve maior reatividade das amostras de leishmaniose tegumentar americana com a utilização dos antígenos obtidos do isolado do complexo Leishmania braziliensis quando comparado com antígenos de Leishmania amazonensis (p<0,001). Observou-se ainda que a sensibilidade do teste ELISA variou de 60 a 95 por cento entre os antígenos obtidos do isolado do complexo Leishmania braziliensis. Houve acentuada reatividade inespecífica das amostras de soros com a utilização das frações antigênicas ligantes de Concanavalina-A e Jacalina de ambos os complexos Leishmania em comparação aos demais antígenos (p<0,001). Os resultados apresentados no presente trabalho sugerem que a utilização de antígenos homólogos aumentam a eficiência de detecção de imunoglobulina anti-Leishmania o que pode ser de grande valia para o propósito de diagnóstico.

Perfil de isotipos de imunoglobulinas e subclasses de IgG na leishmaniose tegumentar americana / Immunoglobulin isotype and IgG subclass profiles in american tegumentary leishmaniasis

O presente trabalho avaliou o perfil de anticorpos em amostras de soro de 37 pacientes com diagnóstico clínico confirmado ou compatível com leishmaniose tegumentar americana atendidos no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, MG. Os perfis das classes de imunoglobulinas e subclasses de IgG foram analisados pelo teste ELISA indireto, utilizando-se antígeno solúvel de Leishmania (Leishmania) amazonensis. A avidez dos anticorpos foi determinada pelo tratamento com uréia a 6 M, após incubação dos soros com o antígeno. Observou-se que 97 por cento, 94,6 por cento, 57,5 e 21,5 por cento das amostras testadas apresentaram anticorpos anti-Leishmania das classes IgE, IgG, IgA e IgM, respectivamente e, os perfis das subclasses de IgG demonstraram, IgG1>IgG3>IgG2>IgG4. Os anticorpos IgE anti-Leishmania de alta avidez corresponderam a 44,4 por cento. Por outro lado, IgG e IgA anti-Leishmania foram em sua maioria (62,8 e 47,8 por cento, respectivamente), de média avidez. A variação do perfil de isotipos, bem como a avidez das imunoglobulinas refletiu a complexidade da resposta imune humoral contra a leishmaniose tegumentar americana.

Immunoblotting analyses using two-dimensional gel electrophoresis of Trypanosoma cruzi excreted-secreted antigens

Formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi excretam/secretam uma complexa mistura de moléculas antigênicas. Essa mistura é chamada trypomastigote excreted-secreted antigens e contém uma banda de massa molecular em torno de 150-160kDa que possui excelente performance para diagnóstico de doença de Chagas em immunoblotting. No presente estudo foi caracterizado parcialmente, por gel bidimensional, a proteína de 150-160kDa pela análise da reatividade de anticorpos de pacientes chagásicos nas diversas fases da doença. Proteínas do trypomastigote excreted-secreted antigens foram separadas por eletroforese de alta resolução em duas dimensões (2D) e submetidas a immunoblotting com soros de pacientes chagásicos e não chagásicos. A proteína de 150-160kDa foi identificada em quatro isoformas com pontos isoelétricos variando entre 6,2 a 6,7. As quatro isoformas foram reconhecidas por anticorpos IgM na fase aguda e por anticorpos IgG na fase crônica da doença de Chagas. A isoforma de 150-160kDa, com ponto isoelétrico de aproximadamente 6,4 tornou-se imunodominante dentre as demais com a progressão da doença. Não foi detectada reatividade cruzada com os soros de pacientes não chagásicos ou pacientes infectados com Leishmania sp. Os dados obtidos nesse trabalho, reforçam a importância da utilização do trypomastigote excreted-secreted antigens para o diagnóstico sorológico da doença de Chagas.

Immunoblotting analyses using two-dimensional gel electrophoresis of Trypanosoma cruzi excreted-secreted antigens.

Trypanosoma cruzi trypomastigotes excrete-secrete a complex mixture of antigenic molecules. This antigenic mixture denominated trypomastigote excreted-secreted antigens contains a 150-160 kDa band that shows excellent performance in Chagas' disease diagnosis by immunoblotting. The present study partially characterized by two-dimensional gel electrophoresis the immunoreactivity against the 150-160 kDa protein using sera samples from chagasic patients in different phases of the disease. Trypomastigote excreted-secreted antigen preparations were subjected to high-resolution two-dimensional (2D) gel electrophoresis followed by immunoblotting with sera from chagasic and non-chagasic patients. The 150-160 kDa protein presented four isoforms with isoelectric focusing ranging from 6.2 to 6.7. The four isoforms were recognized by IgM from acute phase and IgG from chronic phase sera of chagasic patients. The 150-160 kDa isoform with IF of approximately 6.4 became the immunodominant spot with the progression of the disease. No cross-reactivity was observed with non-chagasic or patients infected with Leishmania sp. In this study we provide basic knowledge that supports the validation of trypomastigote excreted-secreted antigens for serological diagnosis of Chagas' disease.

Aspectos da transduçäo de sinal na invasäo elular de formas metacíclicas de Trypanosomacruzi / Signal transduction during the cell invasion by metaciclic forms of Trypanosoma cruzi

Neste estudo foi investigado o papel dos resíduos sialil da glicoproteína de 35/5OkDa das formas metacíclicas de T cruzi no processo de invasão das células de mamífero. Após o tratamento de formas metacíclicas da cepa G com neuraminidase bacteriana, o percentual de invasão foi superior ao observado nos controles não tratados. O tratamento enzimático aboliu a reatividade dos parasitas com o antícorpo 3C9 que reconhece epitopos contendo ácido siálico, em contrapartida, a reatividade com lOD8 foi preservada. Ressialilação de gp35/50, por incubação dos parasitas com transialidase e sialil lactose, restaurou a reatividade com o anticorpo 3C9 assim como com a lectina específica para ácido siálico. A capacidade de invasão dos parasitas ressialilados foi comparável aos controles antes da dessialilação, corroborando o conjunto de dados. Gp35/50 purificada, dessialilada pelo tratamento com neuraminidase, liga-se de forma mais efetiva à célula hospedeira quando comparado ao controle não tratado. Analisando os dados de mobilização de cálcio intracelular na célula hospedeira, as preparações de parasitas e mucina purificada dessialilados induzem elevação de cálcio significativamente maior que os controles não tratados, em concordância com os dados de invasão. Modificação dos índices de invasão ou na sinalização de cálcio não foram observados quando do tratamento de tripomastigotas metacíclicos da cepa CL, que apresenta uma mucina variante, aparentemente não implicada no processo de invasão. Também foi examinada neste trabalho a dinâmica de fosforilação de resíduos tirosina em T. cruzí requerida para o processo de invasão. Tripomastigotas metacíclicos e de cultivo de tecidos tratados com genisteína, um inibidor da atividade tirosina quinase, têm menor capacidade de invasão de células quando comparados aos controles não tratados. Um fator solúvel contido no extrato de células HeLa e ausente no extrato de células K562, as quais são resitentes à invasäo por T cruzi, promove a fosforilação de uma proteína de 175kDa (pl75) em tripomastigotas. Pl75 mostrou-se sensível à genisteína e ausente em formas epimastigotas. A atividade indutora de fosforilação foi abolida pela prévia adsorção com extrato de formas metacíclicas ou com Jl8, a proteína recombinante que contém a sequência completa de gp82, uma glicoproteína especifica de formas metacíclicas implicada no processo de invasão celular. O mesmo ...(au)

Experimental infection of Calomys callosus (Rodentia, Cricetidae) by Toxoplasma gondii

Calomys callosus, Renagger 1830 (Rodentia, Cricetidae), a wild rodent found in Central Brazil, was studied to investigate its susceptibility to Toxoplasma gondii experimental infection and its humoral immune response against this protozoa. The electrophoretic profile of the serum proteins of C. callosus showed that IgG, which shows no affinity to Protein A, has higher cross reactivity with rat IgG than with IgG from other rodents. The susceptibility assay was performed by inoculation groups of animals with various suspensions of T. gondii tachyzoites from 10² to 10 6 parasites. All animals died between 3 and 9 days after infection and the kinetics of andibody synthesis was determined. Basically, they recognized predominantly the immunodominant antigen SAG-1 (P30). The immunohistochemistry assays revealed that the liver was the most heavily infected organ, followed by the spleen, lungs, intestine, brain and kidneys. It can be concluded that C. callosus is an excellent experiment model for acute phase of Toxoplasma infection.

Estudos de freqüência, morfologia e diagnóstico de Entamoeba gingivalis, Gros, 1849 / Frequency, morphology and diagnosis studies of Entamoeba gingivalis, Gros, 1849

Entamoeba gingivalis is found only in its trophozoite form and it is postulated that its main transmission mechanism is through the kiss. E. gingivalis is considered pathogenic by some authors and commensal to others. It does not have a defined role in the installation of disease. To address some of this questions we studied a 100 patients who were seen through the Odontological Hospital from the Universidade Federal de Uberlândia in order to determine its frequency in the buccal cavity. The material were collected using swabs from four different buccal sites and the smears were stained by a modified Papanicolaou technique. The results revealed positivity index of 62 per cent. The affinity of the dye to the food vacuole contents and to the ingested bacterias prevents clear visualisation of the central and peripherical chromatin constituents of the parasite's nucleus. Mouth washes with 3ml of saline from 10 patients, were used to evaluate which parasitological method of diagnosis (fresh, iron-haematoxylin stained, Giemsa and Papanicolaou) gives better visualisation of the parasite. The mouth washes sediment from fresh material revealed 100 per cent of positivity and clear visualisation of the free form and locomotion of the trophozoites. No stained technique of the smear showed adequate visualisation, presenting the nucleus partially covered by the food vacuoles. In stained preparations by toluidine blue ultrastructure analysis of the morphology of parasite can be observed.

Miiases orais: aspectos clínicos-laboratoriais de um caso humano / Oral miyasis: clinical and laboratory aspects of the one human case

Os autores relatam um caso de miiase oral causada por larvas de Chochliomyia homonivorax, associada à Leishmaniose Cutânea Mucosa. Informam as principais peculiaridades clínico-laboratoriais da associaçäo das duas patologias e discutem aspectos de importância epidemiológica

Miasis orales: aspectos clínicos y de laboratorio de cuatro casos humanos (trad) / Oral miyasis: clinical and laboratory aspects of four human cases

Se describen cuatro casos humanos de miasis bucales producidos por larvas de Cochliomyia Hominivorax (Coquerel, 1858) y Phaenicia Sericata (Meigen, 1826). Son abordados aspectos clínicos y de laboratorio de importancia epidemiológica regional

Estudos de frequencia, diagnostico e caracterizacao morfologica de Entamoeba gingivalis, Gros, 1849

Entamoeba gingivalis e uma ameba parasita da cavidade bucal humana, encontrada nas gengivas ao lado dos dentes e principalmente na placa bacteriana dentaria. Sua presenca em individuos com doencas periodontais pode chegar a 100 por cento. Encontrada unicamente na forma trofozoita, e postulado que o principal mecanismo de transmissao seja atraves do beijo. Patogenica para alguns autores, comensal para outros E. gingivalis nao possui definido o seu papel na instalacao das doencas periodontais. Estudos de frequencia de Entamoeba gingivalis entre 100 pacientes atendidos nos ambulatorios odontologicos da U.F.U., utilizando-se esfregacos corados pela tecnica de Papanicolaou modificado, revelaram um expressivo indice de 62,0 por cento de positividade. A afinidade do corante pelo conteudo vacuolar fagocitico e pelas bacterias ingeridas impede uma nitida visualizacao das cromatinas central e periferica constituintes do nucleo do parasita. Lavados bucais com 3 ml de salina, de 10 pacientes, foram utilizados para avaliare em qual metodo parasitario de diagnostico (a fresco, cultura, coloracao por hematoxilina ferrica, Giemsa e Papanicolaou) ocorre melhor visualizacao dos caracteres morfologicos: tamanho, forma, tipos de pseudopodes aspectos do endo e ectoplasma e disposicao da cromatina central e periferica. O exame a fresco do sedimento do lavado bucal revelou 100,0 por cento de positividade e nitida, visualizacao das formas livres e "de locomocao" dos trofozoitos. Nao houve crescimento em cultura e nenhuma tecnica de coloracao dos esfregacos se ostrou adequada, apresentando o nucleo frequentemente mascarado pelos vacuolos fagociticos. Em observacao a fresco E. gingivalis se apresenta em estagio movel de contorno irregular, com locomocao rapida atraves de pseudopodes loboses unidirecionais, medindo ate 70 micrometros quando aderida ao vidro e pseudopodes multidirecionais em forma livre que mede em torno de 30 micrometros. O ectoplasma e hialino e de ectoplasma granuloso. Em preparacoes coradas por azul de toluidina pode-se observar o nucleo esferico, medindo ate 10 micrometros. A analise ultraestrutural de E. gingivalis revelou um nucleo geralmente excentrico e arcabouco nuclear formado por dupla membrana. Projecoes lobosas de citoplasma indicam emissao de pseudopodes pelo parasito, projecoes filiformes foram vista provavelmente indicando o uroide do protozoario. Os ribossomos foram vistos aderidos a face externa da membrana nuclear e a cromatina periferica mostrou-se uniformemente aderida a face interna, exceto nos complexos de poro. Na regiao central do nucleo era evidente a presenca do cariossomo. No citoplasma foram encontradas vesiculas eletrondensas lembrando lisissomos; polissomos; vacuolos digestivos contendo bacterias, estruturas nucleares e material amorfo em diferentes estagios de digestao; mitocondrias foram vistas em pequeno numero e possuiam poucas cristas. Citoesqueleto evidente, complexo de Golgi e Reticulo Endoplasmatico tipicos nao foram vistos